OBJETIVO
Determinar si existen o no Ac irregulares o incompletos fijados en la membrana de los hematíes del paciente enfrentando éstos al reactivo de Coombs específico para ello.
FUNDAMENTO
El suero de Coombs contiene la AGH (inmunoglobulina humana) que actúa creando puentes entre el Ag - Ac lo que permite visualizar la aglutinación.
Material necesario:
- Micropipeta y puntas
- Gradilla
- Tubos de ensayo
- Pipeta Pasteur
- Centrífuga
- Visualizador
Reactivos
- AGH
- SSF
- Hematíes control sensibilizados con IgG.
PROCEDIMIENTO
Lo primero a realizar va a ser un lavado de hematíes, donde vamos a coger hematíes de nuestra muestra y lo depositamos en un tubo de ensayo y se le añade SSF casi hasta enrasar el tubo. Seguidamente lo pusimos a centrifugar 2500 rpm 1 minuto y además tuvimos que equilibrar la centrífuga con un tubo con agua destilada pues éramos el único grupo que la pusimos.
Sacamos el tubo y retiramos el sobrenadante con una pipeta pasteur y volvimos a enrasar con solución salina y a centrifugar.
Cuando acabó le quitamos de nuevo el sobrenadante y realizamos una dilución al 5%, para ello echamos en otro tubo de ensayo 50 μL de hematíes y 950 μL de solución salina.
Tras esto le añadimos 10 gotas de anti-D.
Seguidamente depositamos 3 gotas de AGH en otro tubo y situamos en éste 3 gotas de hematíes de la muestra problema y agitamos de forma suave.
NOTA: Es importante ir rotulando adecuadamente que contiene cada tubo para evitar confusiones.
Luego centrifugamos a 2500 rpm 1 minuto y resuspendimos el sedimento de hematíes dando golpes en el fondo del tubo
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Tubo con muestra y otro con agua destilada para
equilibrar la centrífuga
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| AGH |
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LECTURA DE RESULTADOS
Se pudo observar con ayuda del visualizador la presencia de aglutinación. Por lo que es positivo. Se pueden apreciar grumos oscuros rojos que flotan en el líquido.
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