22.11.19
OBJETIVO
Con esta práctica vamos a aprender a realizar una correcta determinación del grupo sanguíneo ABO como el Rh.
FUNDAMENTO
En el grupo ABO los genes A y B son codominantes entre sí y dominantes sobre el O. El factor Rh es positivo si contiene el Ag D.
La tipificación de la sangre respecto al sistema ABO es la más importante, debido a graves consecuencias que puede tener un error en su realización en caso de transfusiones.
Las técnicas se basan en reacciones de aglutinación, consiste en el agrupamiento de una suspensión de partículas que se debe a la reacción entre un Ag presente en las partículas (aglutinógeno) y un Ac específico de él (aglutinina).
Material necesario:
- Lanceta
- Tarjeta (porta)
- Gradilla
- Tubos de ensayo
- Algodón y alcohol 70º
- Centrífuga
Reactivos:
- Anti-A
- Anti-B
- Anti- AB
- Anti-D
- Control +
- Hematies
PROCEDIMIENTO:
Para ello preparamos primero los reactivos y el porta. Seguidamente cogemos una lanceta, previa desinfección del dedo con alcohol de 70º y realizamos la punción.
Llenamos un capilar con sangre.
Seguidamente echamos una gota de sangre en cada cuadro del porta.
Luego echamos una gota de anti-A en el primer cuadrado, luego otra gota de anti-B en el segundo, una gota de anti - AB en el tercero, y una gota de anti-D en el cuarto, por último depositamos una gota de control en el ultimo cuadrado (este nos sirve de guía para comparar un resultado positivo).
Tras ello mezclamos la suspensión haciendo círculos con punta de pipeta, sin mezclar, es decir cuando acabamos con una lo desechamos y cogemos otra punta para el siguiente cuadrado.
Esperamos un poco para la lectura de los resultados:
Mi resultado fue 0+ (la muestra era de mi propia sangre)
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| Depositando anti - AB |
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| Depositando sangre |
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| Mezclando sangre con reactivo |
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| Resultado 0+ |
Preparamos la gradilla con 6 tubos, ya que uno de ellos es para hacer la solución.
Primero echamos en un tubo de ensayo 0.5 mL de sangre y añadimos SSF hasta enrasar y tapamos con parafilm (esto es muy importante ya que si lo hacemos con tapones chocaran unos con otros produciéndose la rotura de alguno en la centrífuga).
Pusimos los tubos en la centrífuga a 2500 rpm durante 5 minutos.
Tras ello quitamos el sobrenadante, llenamos con solución salina y volvemos a centrifugar, quitamos de nuevo sobrenadante, y así otra vez más.
Seguidamente cogemos 0.1 mL de sangre y añadimos 1,9 mL de SSF, esta será nuestra muestra diluida y lavada.
Seguidamente cogemos los 5 tubos y los rotulamos correctamente
Añadimos una gota de suero que corresponda a cada tubo y añadimos 3 o 4 gotas de sangre
Leemos resultados.
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| Quitando sobrenadante |
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| No aglutina |
LECTURA DE RESULTADOS:
Como pudimos observar no aglutinó en ninguno, pero es que esta muestra corresponde a una compañera de clase que tiene grupo sanguíneo 0 - por lo que no debe aglutinar nada.
OBSERVACIONES:
Es importante poner los tubos correctamente en la centrífuga por que podría atascarse y originar accidentes, como nos ocurrió en clase, por lo que tuvimos que empezar de nuevo tras el incidente.
25.11.19
- Determinación del grupo sanguíneo en tarjeta.
Lo primero que vamos a realizamos fue identificar la tarjeta ID_Card con el nombre de la compañera a la que se lo realizamos.
Luego, como disponíamos de sangre venosa diluida al 1/20, colocamos un poco de esa sangre en un tubo de ensayo y el resto lo pusimos a centrifugar a 2500 rpm 8 minutos para que se separe y obtener el plasma.
Pero tras 3 intentos vimos que no se separaba del todo, es más parecía que estaba hemolizado, aun asi lo anotamos esta incidencia y continuamos con la prueba.
Tras esto retiramos la lámina de sellado y fuimos dispensando lo correspondiente y tapando acto seguido.
Para ello procedimos de la siguiente forma:
En los tubos correspondientes al grupo sérico dispensamos con una micropipeta 50 µL en cada uno de plasma. y en el microtubo 6 pusimos 50 µL de hematíes A1 y en el tubo 5 echamos 50 µL de hematíes B.
Luego echamos en los 4 primeros microtubos 10µL de sangre total.
Acto seguido lo tapamos bien con parafilm y pusimos la tarjeta en una centrífuga especial para ello llamada Diacell.
Estuvo centrifugando 10 minutos, ya viene preparada para ello
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| Muestra de sangre |
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| Tarjeta que usamos |
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| Hematíes a emplear |
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| Agregando hematíes |
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| Centrífuga Diacell |
LECTURA DE RESULTADOS:
Como pudimos comprobar no se observó aglutinación en el A ni en el B del grupo hemático pero si en el D porque nuestra compañera es 0+, además el grupo sérico si aglutinó en los dos porque ella en su suero tiene Ac - anti A y Ac - anti B por lo que es lógico que aglutine en los dos. El control en este caso debe salir negativo.
OBSERVACIONES
Hay que alejarse de la centrífuga Diacell cuando está en funcionamiento porque detecta muchas vibraciones e interrumpe su programa.
