PRÁCTICA 21: TBIC

24.02.2020 PRINCIPIO DEL MÉTODO  

La transferrina sérica se satura con un exceso de Fe3+ y el exceso no fijado se elimina por precipitación con carbonato magnésico, determinándose a continuación la cantidad total de hierro presente. La diferencia entre la capacidad de fijación total de hierro hallada (CFTH) y el hierro sérico inicial (Hb) nos da la capacidad de fijación de hierro no saturado o residual.  

SIGNIFICADO CLÍNICO 

El hierro es el constituyente de un gran número de enzimas. La mioglobina, proteína muscular, contiene hierro, así como el hígado. El hierro es necesario para la producción de hemoglobina, molécula que transporta el oxígeno en el interior de los glóbulos rojos.  El hierro se controla, normalmente, junto con la capacidad de fijación total del hierro (CFTH), y nos indica la capacidad de unión sérica disponible. Encontramos niveles altos de CFTH en la anemia ferropénica. Niveles bajos en hemocromatosis, cirrosis, hepatitis aguda. El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de

laboratorio. 

REACTIVOS 

REACTIVOS ADICIONALES 

El sobrenadante obtenido se procesa como muestra para la determinación del hierro.

PREPARACIÓN  

Los reactivos están listos para su uso. 

 MATERIAL ADICIONAL  

• Centrífuga
• Espectrofotómetro
• Gradillas
• Tubos de ensayo
• Micropipetas y puntas

MUESTRAS  

Suero o plasma heparinizado. Libre de hemólisis. 

PROCEDIMIENTO  

1. Pipetear en un tubo:

 

2. Mezclamos bien e incubar 10 minutos a Temperatura ambiente.

3. Añadir a cada tubo:

 

4. Mezclamos bien e incubar 10 minutos a temperatura ambiente. 

5. Centrifugar 15 min. a 3000 r.p.m. 

6. Recogimos el sobrenadante, cuidadosamente y procesamos como una muestra para la determinación de hierro.  

CÁLCULOS  

CFTH = Concentración de hierro en el sobrenadante x 3 ( Factor de dilución) 

VALORES DE REFERENCIA 

Suero o plasma:  200 – 400 μg/dL      36-72  mol/L 

Estos valores son orientativos. 

Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia. 

 RESULTADOS

Absorbancia patrón: 0,097

Absorbancia muestra: 0,137

(0,137/0,097)X100X3 = 300 µg/dL Podemos observar que se encuentra dentro de los valores normales. ESQUEMA DEL PROCESO

PRÁCTICA 20: DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE HIERRO.

25.02.2020

PRINCIPIO DEL METODO  

El hierro se disocia del complejo sérico hierro-transferrina en medio ácido débil. El hierro libre se reduce a ión ferroso mediante el ácido ascórbico. Los iones ferrosos en presencia de FerroZine forma un complejo coloreado: 

La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de hierro en la muestra ensayada. 

SIGNIFICADO CLINICO 

El hierro es el constituyente de un gran número de enzimas. La mioglobina, proteína muscular, contiene hierro, así como el hígado. El hierro es necesario para la producción de hemoglobina, molécula que transporta el oxígeno en el interior de los glóbulos rojos. Su déficit causa anemia ferropénica. Se encuentran niveles elevados de hierro en la hemocromatosis, cirrosis, hepatitis aguda y en concentraciones altas de transferrina. La variación día a día es común en poblaciones sanas.

 El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio. 

REACTIVOS 

PREPARACION 

Reactivo de trabajo (RT): 

Disolvimos el contenido de un tubo de R 2 Reductor en un frasco de R 1 Tampón. Tapamos y mezclamos suavemente hasta disolver su contenido. 

MATERIAL ADICIONAL  

• Cubetas de 1,0 cm de paso de luz. 
• Espectrofotómetro
• Micropipetas y puntas.
• Gradillas
• Tubo de ensayo. 

MUESTRAS  

Suero o plasma heparinizado. Libre de hemólisis. Separado lo antes posible de los hematies. 

 PROCEDIMIENTO  

1. Ajustar la longitud de onda a 562 nm.

2. Pipetear en una cubeta:  

3. Mezclamos e incubamos 10 min a temperatura ambiente. 

4. Lemos las absorbancias (A) del Patrón y la muestra frente al Blanco de reactivo. 

El color es estable como mínimo 30 minutos.   

 VALORES DE REFERENCIA 

Hombres 65-175 μg/dL       11,6-31,3 mol/L 

Mujeres 40-150 μg/dL       7,16-26,85 mol/L 

RESULTADOS.

Absorbancia patrón: 0,091

Absorbancia muestra: 0,141

(0,141/0,091)X100 = 154,94 μg/dL

Desconocemos si la muestra es de un hombre o de una mujer. 

En el caso de que sea de un hombre los valores se encuentran dentro de la normalidad, pero si se trata de una mujer son ligeramente altos 

ESQUEMA DEL PROCESO

PRÁCTICA 19: TINCIÓN DE RETICULOCITOS

21.02.2020

OBJETIVO

Determinar RET por un número determinado de hematíes.

Calcular el número de reticulocitos existentes por volumen de sangre.

Valorar el RET, el número absoluto de reticulocitos y la actividad eritropoyética.

MATERIAL.

• Gradilla y tubo pequeño de ensayo y papel de parafilm.
• Tres pipetas de Pasteur desechables y 2 potaobjetos.
• Microscopio y aceite de inmersión.
• Lanceta.
• Alcohol.

REACTIVOS.

• Colorante de azul de cresil brillante

MUESTRA.

Sangre anticoagulada con citrato sódico.

PROCEDIMIENTO.

Colocamos en un tubo tres gotas pequeñas de solución de colorante con una pipeta Pasteur.

Añadimos tres gotas de la muestra sanguínea, para ello nos puncionamos el dedo con una lanceta y la cogemos con una micropipeta y se añade a la solución de colorante.

La mezcla siempre debe ser proporcional 1:1

Tapamos el tubo donde se ha realizado la mezcla con parafilm.

Mezclamos agitando el tubo suavemente para que los eritrocitos absorban bien el colorante.

Dejamos en reposo unos 20 minutos a temperatura ambiente.

Pasado ese tiempo volvimos a homogeneizar la suspensión.

Destapamos el tubo; con una gota de la mezcla, efectuamos una extensión sobre el portaobjetos con el método de cuña

Dejar secar la extensión al aire.

Colocamos la extensión bien seca sobre la platina del microscopio.

Con el objetivo de 40X localizamos una zona de la extensión en que los hematíes se observan bien separados.

Pasamos al objetivo de 100X y ajustamos la luminosidad para observar bien las células.

RESULTADOS

Tras un período de tiempo de búsqueda observamos varios reticulocitos, se observaron con la misma
apariencia que los eritrocitos pero con unas tenues granulaciones en su interior.

A las 6 se puede ver tenuemente un reticulocito.

ESQUEMA DEL PROCESO