PRÁCTICA 14: DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DEL TIEMPO DE PROTOMBINA

31.01.2020

PRINCIPIO DEL MÉTODO  

Basado en el test de A. Quick, el ensayo mide el tiempo transcurrido hasta la formación del coágulo después de la mezcla del plasma con Tromboplastina (un extracto de tejido rico en Factor Tisular, fosfolípidos y calcio). La coagulación se inicia por activación del FVII con el Factor Tisular. 

Material necesario:

• Coagulómetro
• Micropipetas y puntas
• Baño termostático

Reactivos:

PT : Tromboplastina de cerebro de conejo, cloruro cálcico, inhibidor de heparina, tampón y conservantes. Liofilizado.  MUESTRAS Plasma previamente separado y contenido en citrato trisódico.

PROCEDIMIENTO

Encendemos el coagulómetro.
Lo primero que hicimos fue reconstituir el contenido de un vial con 4 mL de agua destilada, luego tapamos el vial y agitamos hasta disolver el contenido evitando la formación de espuma. 

Luego precalentamos a 37 º C el reactivo PT y la muestra durante 7 minutos. 

Introducimos en una cubeta del coagulómetro la varilla de metal, y seguidamente iniciamos el test PT mezclando 200µl de PT con 100µl de plasma citrado precalentado. Para ello se deposita primero el reactivo, se pone la cubeta debajo de la tapadera, se pulsa el botón RESET y se echa seguidamente la muestra a través del agujero de la tapadera, una vez depositado automáticamente empieza a contar el tiempo transcurrido en el momento de la mezcla. Detener en el momento de la formación del coágulo.  El resultado fue 12,9.

RESULTADOS 

Los valores se pueden expresar en segundos, en Tasa de PT (PR,  comparando con un valor de referencia), porcentaje de actividad (%, con curva de calibración utilizando un plasma (pool o liofilizado) de referencia),  o en tasa internacional normalizada (INR): 

INR: ( PT (seg)/PT referencia (seg)) ^ISI

El ISI (Indice de Sensibilidad Internacional) depende del lote de reactivo y del sistema analítico utilizado. Spinreact indica para cada lote de reactivo PT un valor de ISI genérico para detección foto-óptica del coágulo.

VALORES DE REFERENCIA 

Utilizando el coagulómetro BioBas10, a partir de 20 muestras normales se determinó el rango de referencia (95% confianza): 11,1-14,3 segundos.

Tiempo de protombina normal : 14 ISI: 1.26 Realizando la fórmula descrita arriba el resultado fue de 1, por lo que el tiempo de protombina de dicho paciente es patológico.