PRINCIPIO DEL MÉTODO
El Fibrinógeno, en presencia de un exceso de trombina, se transforma en Fibrina. El tiempo de formación del coágulo es inversamente proporcional a la concentración de Fibrinógeno presente en la muestra de plasma. La determinación de fibrinógeno por el tiempo de coagulación de trombina, está basada en el método descrito por Clauss.
En presencia de altas concentraciones de trombina, el tiempo necesario para la formación del coágulo en el plasma diluido es inversamente proporcional a la concentración de fibrinógeno.
SIGNIFICADO CLÍNICO
El Fibrinógeno (Factor I), proteína sintetizada en el hígado, es un componente de la sangre utilizado para formar el coágulo. Su determinación nos ayuda a evaluar las alteraciones en los mecanismos de coagulación. La concentración de fibrinógeno se incrementa en inflamaciones agudas y embarazo; por el contrario se observan valores bajos en terapias trombolíticas, enfermedades hepáticas, disfibrinogenia congénita, DIC (Coagulación intravascular diseminada) y pancreatitis.
REACTIVOS
R 1 Trombina bovina 100 u NIH/mL
R 2 Tampón Imidazol, Azida sódica
R3 Solución Caolín
COAGULATION CAL REF: 1709101 CONTROL NORMAL REF: 1709104 CONTROL PATHOLOGIC REF: 1709106
MATERIAL
Coagulómetro
Micropipetas y puntas
Gradillas
Tubos eppendorf
MUESTRAS Plasma obtenido por punción venosa diluido 1/10
MUESTRAS Plasma obtenido por punción venosa diluido 1/10
PROCEDIMIENTO
Lo primero que hicimos fue reconstituir el R1 en 2,0 mL de agua destilada. Luego tapamos y mezclamos suavemente hasta disolver su contenido, y lo dejamos reposar 15 minutos.
El R2 lo agitamos antes de usar.
R3: Listo para su uso.
1. Preparamos una dilución 1/10 de la muestra y los Controles en Tampón Imidazol: 50 µL de muestra o control + 450 µL de R2 (tampón imidazol).
2. Luego un grupo de clase se encargó de preparar las siguientes diluciones del Calibrador en Tampón Imidazol: (con la construcción de su correspondiente curva de calibración.
3. Luego traspasamos a otro tubo eppendorf 0,2 mL de cada dilución y añadimos 20 µL de R3 y atemperar a 37ºC durante 5 minutos en el coagulómetro, previamente le hemos introducido en la cubeta la varilla de metal.
4. Añadimos 0,1 mL de reactivo R1, con previa inserción de la cubeta y pulsado RESET. Tras caer el R1 empieza a correr el tiempo hasta parar en la formación de coágulos.
Nuestros valores obtenidos fueron:
Muestra: 17,2 segundos
Normal: 28,2 segundos
Patológico: 32,4 segundos
CÁLCULOS
1. Calcular la media de los duplicados de los tiempos de coagulación, inmediatamente después de finalizar la reacción. Utilizar los cinco puntos del calibrador para crear una curva de los tiempos obtenidos frente a los valores de concentración de Fibrinógeno de cada dilución del Calibrador (mg/dL).
2. Trazar la mejor curva. Examinar la curva y, si es necesario, omitir los puntos no lineales. La curva final debe constar de tres puntos consecutivos como mínimo. La creación de la curva sólo con los puntos más lineales producirá la mejor recuperación en los controles y las muestras de paciente.
4 La concentración de Fibrinógeno en la muestra se calcula por interpolación de su tiempo de coagulación en la curva de calibración.
5. Si los tiempos de dilución 1/10 se encuentran fuera de la curva lineal, preparar diluciones a 1/5 ó 1/20, según sea necesario. Si la muestra se diluye a 1/5 dividir el resultado de la curva por 2; si la muestra se diluye a 1/20, multiplicar el resultado por 2 para obtener el resultado final.
RESULTADO:
Además de por interpolación también se puede hacer por la fórmula de la gráfica que nos proporciona excell que nos dará un resultado bastante más preciso, los resultados fueron:
La función es y= -0,1169 X + 56,108
Para el suero normal → Tiempo = 28,2s
x = (28,2-56,108) / (-0,1169) = 238,73 mg/dL
Para el suero patológico → Tiempo = 32,4s
x = (32,4-56,108) / (-0,1169) = 202,8 mg /dL
Para nuestra muestra → Tiempo = 17,2s
x = (17,2-56.108) / (-0,1169) = 332,83 mg/dL
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