PRÁCTICA 18: DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE HEMOGLOBINA POR EL MÉTODO DE DRAVKIN

17.02.2020

FUNDAMENTO

La hemoglobina es oxidada por la acción del ferricianuro a metahemoglobina y mediante el cianuro se convierte en cianmetahemoglobina. La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de hemoglobina presente en la muestra ensayada.

OBJETIVO:

Determinar la concentración de hemoglobina en una muestra de sangre.

UTILIDAD CLÍNICA:

La hemoglobina es una proteína que contiene hierro, otorga el color rojo a la sangre. Se encuentra en los glóbulos rojos y es la encargada del transporte de oxigeno por la sangre desde los pulmones a los tejidos. Cuando el nivel de hemoglobina aparece por debajo de los niveles normales indica anemia que puede obedecer a diferentes causas: anemia primaria, cáncer, embarazo, enfermedades renales o hemorragias.

Si el nivel de hemoglobina es alto puede deberse a cardiopatías, deshidratación o estancia en lugares de gran altitud.

El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

MATERIALES NECESARIOS

• Tubos de ensayo

• Pipetas automáticas

• Puntas de pipeta
• Lanceta

• Pipeta de 5ml y auxiliar de pipeteo

• Cubetas de fotometría

• Gradilla para cubetas

• Gradillas

APARATAJE

Espectrofotómetro

REACTIVOS:

HEMOGLOBIN 50x :

• Ferricianuro de potasio 0,60 mmol/L
• Cianuro de potasio 77 mmol/l
• Dihidrógeno de potasio. 2 mmol/L

HEMOGLOBIN CAL.

Se trata de un patrón de hemoglobina, de origen animal, 15g/dL

MUESTRA.

Sangre capilar.

Tomamos la muestra directamente con una micropipeta a partir de la punción con lanceta.

PRECAUCIONES:

El reactivo es tóxico en caso de ingestión, contacto con la piel o inhalación. Por ello es necesario cumplir los protocolos y tener cuidado en su manipulación.

Este dato también hay que tenerlo en cuenta a la hora de eliminar los residuos ya que tendremos que contar con un contenedor para residuos tóxicos químicos.

PREPARACIÓN DEL REACTIVO DE TRABAJO O REACTIVO DE DRAVKIN.

5mL:       4,9 mL de agua destilada + 2 gotas de Reactivo. (lo mezclamos directamente en el tubo de ensayo)

PROCEDIMIENTO:

Encendemos el espectrofotómetro un rato antes y atemperamos los reactivos.

1. Condiciones del ensayo:

Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 540 nm

Cubeta: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 cm paso de luz

Temperatura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15-25ºC

2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente al blanco, éste contiene Reactivo de Dravkin. De esta forma pretendemos eliminar las interferencias de la cubeta y del reactivo.

Vamos a realizar el MÉTODO MICRO.

3. Pipetear:

4.- Mezclar e incubar 3 minutos a temperatura ambiente (15-25ºC).

5. Leer la absorbancia (A) del calibrador y la muestra, frente al blanco de reactivo.

Una vez preparados los tres tubos necesarios procedemos a medir su absorbancia.

RESULTADOS Y CÁLCULOS.

• Absorbancia del blanco =        0
  

• Absorbancia del patrón =         0,242
  

• Absorbancia de la muestra =   0,213
  

• (Am-Ab)/(Ap-Ab)= (0,213/0,242)x15 = 13,20g/dL
  

VALORES DE REFERENCIA.

Al tratarse de una determinación cuantitativa, necesitamos unos valores de referencia con los que poder comparar nuestros resultados.

Hombres: 14-18 g/dL = 8,7-11,2 mmol/L

Mujeres  : 12-16 g/dL = 7,5-9,9   mmol/L

Estos valores son orientativos, es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia.

RESULTADOS:

13,20 g/dL

Se encuentra dentro de la normalidad.